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qPCR實(shí)驗(yàn)板:40ul全裙邊384孔PCR板透明加白色
本是詳細(xì)解析一下“40ul 全裙邊 384孔 PCR板 透明加白色"的含義、特點(diǎn)和應(yīng)用。這通常指的是一種專(zhuān)為高通量實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)設(shè)計(jì)的微孔板。
一、解析
40ul:
指每個(gè)孔的最大推薦工作容積。這意味著每個(gè)孔可以安全地容納最多40微升的反應(yīng)體系。
實(shí)際使用時(shí),常見(jiàn)的反應(yīng)體積在10-20μl之間(為了降低成本和避免蒸發(fā)),但板子的設(shè)計(jì)保證了即使加到40μl也不會(huì)溢出或難以密封。
它也暗示了孔的設(shè)計(jì)容積(可能為50-60μl甚至更大),以確保有足夠的空間。
全裙邊 :
裙邊是指PCR板四周的突出邊緣。
全裙邊意味著裙邊是完整且?guī)в袡C(jī)械加工孔的。這是最高規(guī)格的裙邊設(shè)計(jì)。
優(yōu)點(diǎn):
機(jī)械強(qiáng)度:不易彎曲變形,在自動(dòng)化處理中至關(guān)重要。
自動(dòng)化兼容性:邊緣的孔可以與自動(dòng)化工作站(機(jī)械臂)的定位銷(xiāo)匹配,實(shí)現(xiàn)精確定位和抓取,減少誤差。
更好的密封性和穩(wěn)定性:為熱封或壓蓋提供更堅(jiān)固的支撐。
384孔:
指板的規(guī)格。標(biāo)準(zhǔn)384孔板有16行 x 24列,孔數(shù)是一般96孔板的4倍。
優(yōu)點(diǎn):通量,顯著降低單個(gè)樣本的試劑成本和耗材成本(因?yàn)榉磻?yīng)體積更小),節(jié)省儀器運(yùn)行時(shí)間和實(shí)驗(yàn)室空間。
缺點(diǎn):對(duì)移液操作精度要求高,通常需要依賴(lài)384通道的電子移液器或自動(dòng)化液體處理工作站。
透明加白色:
這是指板的材質(zhì)和光學(xué)設(shè)計(jì),是qPCR應(yīng)用的核心關(guān)鍵。
白色板體:板的基座和孔壁是白色的。白色是一種高反射材料,其作用是將反應(yīng)中產(chǎn)生的熒光信號(hào)高效地反射回孔的上方,以便被儀器的光學(xué)檢測(cè)器捕獲。
優(yōu)點(diǎn):極大提高熒光信號(hào)強(qiáng)度,減少孔與孔之間的信號(hào)串?dāng)_,提升數(shù)據(jù)的靈敏度和準(zhǔn)確性。特別適合多重?zé)晒鈾z測(cè)和低豐度基因的定量。
透明蓋/透明孔:通常指板蓋是光學(xué)透明的,或者孔壁雖然是白色但底部非常薄且透明。
優(yōu)點(diǎn):透明的蓋子允許qPCR儀的光學(xué)系統(tǒng)從上方無(wú)障礙地讀取每個(gè)孔的熒光信號(hào)。透明的孔底則允許進(jìn)行終點(diǎn)PCR后的凝膠電泳分析(無(wú)需轉(zhuǎn)板),但這不是主要功能。
這種“透明蓋+白色孔"的組合是目前高性能qPCR的黃金標(biāo)準(zhǔn),在信號(hào)強(qiáng)度和信噪比之間取得了最佳平衡。
二、主要特點(diǎn)與優(yōu)勢(shì)總結(jié)
高通量:384孔設(shè)計(jì),一次運(yùn)行最多處理384個(gè)樣本(通常包括標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)、復(fù)孔等)。
高靈敏度與高精度:白色孔壁熒光收集效率,孔間串?dāng)_,提供優(yōu)異的qPCR數(shù)據(jù)質(zhì)量。
自動(dòng)化兼容性:全裙邊設(shè)計(jì)使其適配各類(lèi)液體處理機(jī)器人和高通量篩選平臺(tái)。
熱學(xué)性能優(yōu)異:通常由聚丙烯(PP)制成,導(dǎo)熱快,保證孔間溫度均一性,提升擴(kuò)增效率一致性。
三、主要應(yīng)用場(chǎng)景
超高通量基因表達(dá)分析(RNA-Seq驗(yàn)證、大規(guī)模樣本篩查)。
藥物基因組學(xué)與基因分型。
病原體大規(guī)模檢測(cè)。
下一代測(cè)序(NGS)文庫(kù)的質(zhì)控:對(duì)構(gòu)建好的文庫(kù)進(jìn)行qPCR定量。
任何需要處理大量樣本,并且對(duì)數(shù)據(jù)精密度和準(zhǔn)確性要求的qPCR實(shí)驗(yàn)。
四、使用注意事項(xiàng)
儀器兼容性:務(wù)必確認(rèn)您的qPCR儀支持384孔板運(yùn)行(例如:ABI QuantStudio 5/6/7, Bio-Rad CFX384, Roche LightCycler 480等)。
密封方式:
光學(xué)透明粘性封板膜:需用壓板器確保密封均勻,防止蒸發(fā)。
透明硬質(zhì)蓋板:有些系統(tǒng)使用可重復(fù)使用的硬質(zhì)蓋板。
液體操作:強(qiáng)烈建議使用電子移液器或自動(dòng)化工作站進(jìn)行分液,以確保精度和可重復(fù)性,并保護(hù)操作者免受重復(fù)性勞損(RSI)。
實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì):由于孔數(shù)多,更容易產(chǎn)生邊緣效應(yīng)(邊緣孔蒸發(fā)更快),需要在實(shí)驗(yàn)布局時(shí)加入更多的技術(shù)重復(fù)和對(duì)照,并使用ROX等被動(dòng)參比染料來(lái)校正孔間差異。
注:以上資料僅供參考,不作為實(shí)際數(shù)據(jù),如需具體產(chǎn)品資料請(qǐng)咨詢(xún)技術(shù)老師或品牌商。
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